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任務(wù)占坑
2，反轉(zhuǎn)錄酶的簡(jiǎn)介
這是一種莫洛尼鼠白血病病毒(Moloneymurineleukeminvirus)反轉(zhuǎn)錄酶(簡(jiǎn)稱M-MLVRTase)，這個(gè)酶已經(jīng)作了遺傳性上的改變，即除去了與它聯(lián)在一起的核糖核酸酶H活性(一種專門切割DNA與RNA雜交鏈上RNA分子的酶)。這個(gè)酶應(yīng)用于cDNA的第一鏈合成和引物的延伸。這種酶需要鎂離子或錳離子作為輔助因子，當(dāng)以mRNA為模板時(shí)，先合成單鏈DNA（ssDNA），再在反轉(zhuǎn)錄酶和DNA聚合酶Ⅰ作用下，以單鏈DNA為模板合成“發(fā)夾”型的雙鏈DNA（dsDNA），再由核酸酶S1切成二條單鏈的雙鏈DNA。因此，反轉(zhuǎn)錄酶可用來(lái)把任何基因的mRNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA拷貝，然后可大量擴(kuò)增插入載體后的cDNA。也可用來(lái)標(biāo)記cDNA作為放射性的分子探針。逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV）從MoloneyMurineLeukemiaVirus分離出來(lái)，可用于合成第一鏈cDNA、制作cDNA探針、RNA轉(zhuǎn)錄、測(cè)序和RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。本酶是通過(guò)點(diǎn)突變使RNaseH活性缺失，所以它具有的DNA聚合酶的活性與野生型相同，同時(shí)其延伸能力也有顯著提高。逆轉(zhuǎn)錄酶（M-MLV）一個(gè)活性單位定義為在37℃，10min條件下，使1nmol的脫氧核糖核酸摻入酸性沉淀物質(zhì)所需的酶量。
